分光光度計采用一個可以產生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產生特定波長的光源，光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
分光光度計對工作環境的要求如下：
①儀器應安放在干燥的房間內，使用溫度為5～35℃．相對濕度不超過85％。
②分光光度計應放置在堅固平穩的工作臺上，且避免強烈的振動或持續的振動。
③室內照明不宜太強，且應避免直射日光的照射。
④電扇不宜直接向儀器吹風，以防止光源燈因發光不穩定而影響儀器的正常使用。
⑤盡量遠離高強度的磁場、電場及發生高頻波的電器設備。
⑥供給分光光度計的電源電壓為AC220V±22V，頻率為50Hz±1Hz，并必須裝有良好的接地線。推薦使用功率為1000w以上的電子交流穩壓器或交流恒壓穩壓器，以加強儀器的抗干擾性能。
⑦避免在有硫化氫等腐蝕性氣體的場所使用。
分光光度計的正確使用和保養也很重要，我們應該做到以下幾點:堅持標準溶液現用現配，不使用過期溶液;比色皿應保持清潔、干燥，禁止用硬物碰擦透明表面;防止儀器振動，影響測量穩定性;在開機狀態，不測量時，應打開樣品池門，延長光電傳感器壽命;樣品集中測量，避免開機次數，延長光源壽命;一旦停機，則應待燈冷卻后再重新啟動，并預熱15 min左右再使用;要經常更換儀器的干燥劑，防止光學元件和光電傳感器受潮生霉;儀器搬動或更換重要部件后，要重新進行性能確認，以保證分光光度計測量結果的準確。
